Antigenic properties of sARs-CoV-2/human/RUs/nsk-FRCFtM-1/2020 coronavirus isolate from a patient in novosibirsk

Чепурнов А. А.; Шаршов К. А.; Казачинская Е. И.; Кононова Ю. В.; Казачкова Е. А.; Хрипко О. П.; Юрченко К. С.; Алексеев А. Ю.; Воевода М. И.; Шестопалов А. М.

Статья

Антигенные свойства изолята коронавируса SARS-CoV-2/human/RUS/Nsk-FRCFTM-1/202, выделенного от пациента в Новосибирске

Чепурнов А. А., Шаршов К. А., Казачинская Е. И., Кононова Ю. В., Казачкова Е. А., Хрипко О. П., Юрченко К. С., Алексеев А. Ю., Воевода М. И., Шестопалов А. М.,

2020

https://doi.org/10.22625/2072-6732-2020-12-3-42-50

Цель: изоляция коронавируса SARS-CoV-2 из образцов носоглоточных мазков, положительных на наличие РНК SARS-CoV-2, получение инактивированного цельновирионного антигена и изучение его антигенных свойств. Материалы и методы: изоляцию вируса проводили на культуре клеток Vero из вируссодержащего образца клинического материала (мазок из носоглотки). Эффективность репликации вируса SARS-CoV-2 на культуре клеток оценивали по динамике появления цитопатического действия и наличию вирусной РНК при анализе культуральной жидкости методом обратной транскрипции – полимеразной цепной реакции. Очистку, концентрацию и инактивацию вирусного препарата проводили по стандартной методике. Степень чистоты очищенного препарата и профиль вирусных белков определяли методом электрофореза в 10% полиакриламидном геле с добавлением додецилсульфата натрия. Наличие и специфичность вирусных белков выявляли с помощью сывороток крови реконвалесцентов с диагнозом «COVID-19» методами иммуноферментного анализа и иммуноблоттинга. Результаты: из вируссодержащего клинического образца был выделен изолят SARS-CoV-2/human/RUS/ Nsk-FRCFTM-1/2020 и получен очищенный, концентрированный, инактивированный цельновирионный антиген, содержащий три структурных белка – гликопротеин S (примерно 200 кДа), нуклеопротеин N (48 кДа) и матриксный М (20-25 кДа), выявляемые антителами сывороток крови реконвалесцентов с диагнозом COVID-19. Заключение: показана возможность изоляции коронавируса SARS-CoV-2 на культуре клеток Vero. В очищенном вирусном препарате, инактивированном в лизирующем растворе, сохраняется антигенная специфичность трех структурных вирусных белков (S, N, и М), выявляемых антителами сывороток крови реконвалесцентов с диагнозом COVID-19. Инактивированный цельновирионный антиген изолята SARS-CoV-2/human/ RUS/Nsk-FRCFTM-1/2020 может быть использован для изучения антигенных иммуномодулирующих свойств вирусных белков, получения иммунных сывороток лабораторных животных, а также в качестве компонента тест-систем для выявления специфичных антител методом ИФА и иммуноблоттинга.

Цитирование

Список литературы

1. Virus Taxonomy: 2019 Release. EC 51, Berlin, Germany, July 2019. [Электронный ресурс]. URL: https://talk.ictvonline.org/taxonomy/ (дата обращения 10.06.2020).

2. Masters, P.S. The molecular biology of coronaviruses / P.S. Masters // Adv. Virus. Res. – 2006. – Vol. 66. – P. 193- 292. – doi: 10.1016/S0065-3527(06)66005-3.

3. Accessory proteins of SARS-CoV and other coronaviruses / D.X. Liu, T.S. Fung, K.K. Chong, et al. // Antiviral Res. – 2014. – Vol. 109. – P. 97-109. – doi: 10.1016/j.antiviral.2014.06.013.

4. The origin, transmission and clinical therapies on coronavirus disease 2019 (COVID-19) outbreak – an update on the status / Y.R. Guo, Q.D. Cao, Z.S. Hong, et al. // Mil. Med. Res. – 2020. – Vol. 7. – N. 1. – P. 11. – doi: 10.1186/s40779-020-00240-0.

5. Вступительное слово Генерального директора ВОЗ на брифинге по COVID-19 для постоянных представительств – 12 марта 2020 г. [Электронный ресурс]. URL: https://www.who.int/ru/dg/speeches/detail/who-directorgeneral-s-opening-remarks-at-the-mission-briefing-on-covid-19---12-march-2020 (дата обращения 19.06.2020).

6. Virus Isolation from the First Patient with SARS-CoV-2 in Korea / W.B. Park, N.J. Kwon, S.J. Choi, et al. // J. Korean Med. Sci. – 2020 – Vol. 35. – N. 7. – e84. – doi: 10.3346/jkms.2020.35.e84.

7. Получение очищенного вируса Эбола / А.А. Чепурнов [и др.] // Вопросы вирусологии. – 1994. – Т. 39, № 6. – С. 254–257.

8. Разумов, И.А. Антигенные отличия дикого и адаптированного к морским свинкам штаммов вируса Эбола / И.А. Разумов, Е.И. Казачинская, А.А. Чепурнов // Вопросы вирусологии. – 2010. – Т. 55. – №. 6. – С. 35-38.

9. Взаимодействие фрагментов оболочечного белка вируса Зика с антителами сывороток людей, переболевших флавивирусными инфекциями / Д.В. Шаньшин [и др.] // Инфекция и иммунитет. – 2020. – Т. 10, № 1. – С. 73– 82. – doi: 10.15789/2220-7619-AIO-805.

10. Казачинская, Е.И. Штамм гибридных клеток животного Mus musculus L. 5Н6 – продуцент моноклональных антител для выявления гликопротеина Е вируса Западного Нила; моноклональные антитела 5Н6, продуцируемые указанным штаммом гибридных клеток и иммуноферментный набор для выявления гликопротеина вируса Западного Нила с использованием указанных моноклональных антител / Е.И. Казачинская, И.А. Разумов, В.Б. Локтев // Патент на изобретение RU 2595429 C1, 27.08.2016. Заявка № 2015115059/10 от 21.04.2015.

11. Sturman L.S. I. Structural Proteins: Effects of Preparative Conditions on the Migration of Protein in Polyacrylamide Gels. / L.S. Sturman. // J. Virol. – 1977. – Vol. 77. – N. 2. – P. 637- 649. – doi: 10.1016/0042-6822(77)90488-3.

12. Dea S. Identification and Location of the Structural Glycoproteins of a Tissue Culture-Adapted Turkey Enteric Coronavirus. / S. Dea, S. Garzon, P. Tijssen // Arch Virol. – 1989. – Vol. 106. –N. 3-4. – P. 221-237. doi: 10.1007/BF01313955.

13. A complete sequence and comparative analysis of a SARS-associated virus (Isolate BJ01) / E.D. Qin, Q.Y. Zhu, M. Yu, et al. // Chin. Sci. Bull. – 2003. – N. 48. – P. 941-948. doi: 10.1007/BF03184203.

14. Rapid Development of an Inactivated Vaccine Candidate for SARS-CoV-19 / Q. Gao, L. Bao, M. Haiyan, et al. // Science. – 2020. – eabc1932. – doi: 10.1126/science.abc1932

15. Kuo L. Analyses of Coronavirus Assembly Interactions With Interspecies Membrane and Nucleocapsid Protein Chimeras. / L. Kuo, K.R. Hurst-Hess, C.A. Koetzner, et al. // J. Virol. – 2016. – Vol. 90. – N. 9. – P. 4357-4368. – doi: 10.1128/JVI.03212-15.

16. Liu X. Profile of Antibodies to the Nucleocapsid Protein of the Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS)-associated Coronavirus in Probable SARS Patients. / X. Liu, Y. Shi, P. Li, et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. – 2004. – Vol. 11. – N. 1. – P. 227-228. – doi: 10.1128/cdli.11.1.227-228.2004.

17. van der Hoek L. Human coronaviruses: what do they cause? / L. van der Hoek // Antivir. Ther. – 2007. – Vol. 12. – N. 4. – Pt. B. – P. 651-658.

18. SARS and MERS: recent insights into emerging coronaviruses / E. de Wit, N. van Doremalen, D. Falzarano, et al. // Nat. Rev. Microbiol. – 2016. – Vol. 14. – N. 8. P. 523-534. – doi: 10.1038/nrmicro.2016.81.

19. SARS-CoV-2 Cell Entry Depends on ACE2 and TMPRSS2 and Is Blocked by a Clinically Proven Protease Inhibitor / M. Hoffmann, H. Kleine-Weber, S. Schroeder, et al. // Cell. – 2020. – Vol. 181. – N. 2. – P. 271-280. – e8. – doi: 10.1016/j.cell.2020.02.052.

20. Use of viral lysate antigen combined with recombinant protein in Western immunoblot assay as confirmatory test for serodiagnosis of severe acute respiratory syndrome / M. Guan, H.Y. Chen, P.H. Tan, et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. – 2004 – Vol. 11. – N. 6. P. 1148–1153. – doi: 10.1128/CDLI.11.6.1148-1153.2004.

21. Antibody responses to individual proteins of SARS coronavirus and their neutralization activities / M. Qiu, Y. Shi, Z. Guo, et al. // Microbes Infect./Institut Pasteur. – 2005. – Vol. 7. – N. (5-6). – P. 882-889. – doi: 10.1016/j.micinf.2005.02.006.

22. Temporal profiles of viral load in posterior oropharyngeal saliva samples and serum antibody responses during infection by SARS-CoV-2: an observational cohort study / K.K. To, O.T. Tsang, W.S. Leung, et al. // Lancet Infect. Dis. – 2020. – Vol. 20. – N. 5. – P. 565-574. – doi: 10.1016/S1473-3099(20)30196-1.

23. Profile of IgG and IgM antibodies against severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) / J. Qu, C. Wu, X. Li, et al. // Clin. Infect. Dis. – 2020. – ciaa489. – doi: 10.1093/cid/ciaa489.

24. Serological responses in patients with severe acute respiratory syndrome coronavirus infection and cross-reactivity with human coronaviruses 229E, OC43, and NL63. / K.H. Chan, V.C. Cheng, P.C. Woo, et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. – 2005. Vol. 12. – N. 11. – P. 1317-1321. – doi: 10.1128/CDLI.12.11.1317-1321.2005.

Источник

Версии

1. Version of Record от 2020-07-31

Метаданные

Об авторах

Чепурнов А. А.
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Шаршов К. А.
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Казачинская Е. И.
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Кононова Ю. В.
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Казачкова Е. А.
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Хрипко О. П.
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Юрченко К. С.
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Алексеев А. Ю.
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Воевода М. И.
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН
Шестопалов А. М.
Федеральный исследовательский центр фундаментальной и трансляционной медицины Сибирского отделения РАН

Предметная рубрика

COVID-19

Название журнала

Journal Infectology

Страницы

42-50

Тип документа

journal article

Тип лицензии Creative Commons

CC BY

Правовой статус документа

Свободная лицензия

Источник

elpub

Поиск по репозиторию

Статья

Антигенные свойства изолята коронавируса SARS-CoV-2/human/RUS/Nsk-FRCFTM-1/202, выделенного от пациента в Новосибирске

Похожие публикации

Источник

Версии

Метаданные